Содержание
Электрофорез в агарозном геле - это научная процедура, используемая в исследовательских и диагностических проектах, связанных с изучением нуклеиновых кислот. Это позволяет ученому или техническому специалисту разделять заряженные молекулы нуклеиновой кислоты, такие как ДНК, в соответствии с их размером, и используется для анализа продуктов, генерируемых в ходе эксперимента, таких как полимеразная цепная реакция. Он обычно используется, потому что он недорогой, быстрый процесс и позволяет извлекать анализируемую нуклеиновую кислоту.
Делать гель
Соберите все необходимые предметы и почистите их 70% этанолом. К ним относятся лоток для гель-литья, клейкая лента, лабораторная агароза, колбы или цилиндры, 10-кратный буферный раствор (трис-борат-ЭДТА, TBE), бромид этидия, краситель и анализируемый образец. Также убедитесь, что у вас есть резервуар для гель-электрофореза и источник питания. Агарозу готовят путем взвешивания соответствующего количества ДНК-ленты для анализа, смешивания ее с буфером TBE и плавления в микроволновой печи. Как правило, от 1 до 2% раствора достаточно для покрытия многих нитей ДНК, изучаемых в повседневной молекулярной биологии. Маленькие ДНК требуют более концентрированных гелей, в то время как более крупные требуют более разбавленных гелей. Раствор агарозы смешивают с бромидом этидия, который связывается с нуклеиновой кислотой во время процедуры электрофореза. Этот раствор наливают в поддон для геля для расплава, как только вставляют формовочную гребенку, и смесь оставляют для затвердевания.
Вставьте и активируйте гель
Гель удаляют из поддона и погружают в резервуар для гель-электрофореза, содержащий рабочий буфер. Образцы для анализа смешивают с красителями и помещают в лунки в геле, созданном гребенкой. Маркер или шкала также включены, чтобы позволить исследователю видеть прогресс электрофореза и определить размер генерируемых фрагментов. Затем на гель подается электрический ток, который заставляет образец мигрировать от одного конца геля к другому. Во время этого процесса нуклеиновые кислоты в образце разделяются на фрагменты разных размеров, причем более крупные молекулы приближаются к лунке, а более мелкие молекулы перемещаются к другому концу геля.
Анализируйте гель
После завершения процедуры электрофореза гель удаляют из резервуара и помещают в ультрафиолетовый трансиллюминатор, который освещает фрагменты нуклеиновой кислоты, которые связываются с флуоресцентным бромидом этидия. Сделана фотография этого, и полосы нуклеиновых кислот могут быть измерены в соответствии с расстоянием, которое мигрировало через гель. Шкала разделит их на полосы известных размеров и может использоваться для руководства исследователем во время анализа.