Как сделать агарозные гели

Видео: Электрофорез в геле (видео 3) | Генная инженерия |Молекулярная генетика

Содержание

направления
Приготовление агарозного геля
предупреждение
Что вам нужно

Агарозные гели изготавливаются учеными, работающими в лабораториях молекулярной биологии для изучения фрагментов ДНК, которые модифицируются в ходе экспериментальной работы. Техника приготовления агарозного геля является фундаментальным рутинным навыком, который должен быть освоен всеми исследователями, поскольку он позволяет прямую визуализацию ДНК различных размеров для проектов верификации и клонирования генов. Хотя приготовление геля не сложно, как и во всех лабораторных процедурах, его должен проверять только специалист, прошедший научную подготовку в связи с биологическими рисками.

направления

Как сделать агарозные гели (Comstock Images / Comstock / Getty Images)

Приготовление агарозного геля

Убедитесь, что гелевые основы не имеют трещин или чего-либо, что может привести к вытеканию горячей агарозы. Очистите противни 70% -ным спиртом и дайте полностью высохнуть. Основание имеет два открытых конца и два закрытых конца. В некоторых форматах зажимы поставляются с ними для того, чтобы закрыть концы, но большинство из них должны быть загерметизированы путем размещения полосок ленты между открытыми частями. Плотно и надежно прижмите ленту, так как она может отодвинуться от держателя и позволить горячей агарозе вытечь.
Исходя из размера фрагмента ДНК, который нужно отделить и проанализировать на агарозном геле, определите соответствующий процент, который будет необходим. Например, при 1% (вес / объем) гель агарозы будет эффективен для анализа сегментов ДНК размером от 0,5 до 10 т.п.н. Чем выше процент (больше агарозы), тем меньше фрагментов, которые можно отделить. Обычные эксперименты используют диапазон от 0,5% до 2% агарозы. Для 1% агарозного геля взвесьте 1 г порошка агарозы в химической заправке или другой системе удержания. Осторожно перенести в зону лабораторного приготовления геля.
В соответствующей области приготовления геля отмерьте 100 мл буфера для электрофореза. Это должно быть при комнатной температуре. Перенесите порошок агарозы в огнеупорную колбу и вылейте измеренный объем буфера для электрофореза. Осторожно нагрейте смесь в микроволновой печи, но не кипятите ее, поскольку испарение может изменить процент присутствующей агарозы. Убедитесь, что вся агароза растворена, встряхните, чтобы тщательно перемешать, дайте немного остыть, а затем добавьте 0,5 микрограмма на миллилитр бромистого этидия. Не вдыхайте пары, так как это может раздражать легкие и слизистые ткани. Кроме того, не нагревайте раствор после добавления бромида этидия. Встряхните еще раз, чтобы перемешать, и затем, пока раствор все еще достаточно горячий, чтобы пролить его, добавьте его в подготовленную основу. Обратите внимание, что если присутствует большой объем образца или небольшая концентрация ДНК, может быть сделан более густой гель. Однако более тонкие гели легче анализировать, потому что они будут более четко сфотографированы.
Вставьте расчески в гель, чтобы создать углубления или лунки для образца, который нужно поместить. Дайте ему остыть до комнатной температуры в течение нескольких часов или в холодильнике в течение нескольких минут. В последнем случае, как только гель будет готов, следует наблюдать присутствие кристаллов агарозы. Обычно они исчезают, если гелю дают нагреться до комнатной температуры на столешнице в течение нескольких минут перед использованием. Осторожно снимите расчески, чтобы не порвать гель и не разбить лунки. Агарозный гель теперь готов к использованию. Если его не использовать немедленно, его нужно будет завернуть в целлофан или хранить в пластиковом контейнере в холодильнике, чтобы предотвратить его высыхание или таяние.

предупреждение

Используемые реагенты являются возможными канцерогенами и требуют осторожного обращения с ними. Если во время приготовления геля была допущена ошибка, его никогда не следует повторно нагревать, а устранять и снова готовить новый гель.