Содержание
Туберкулез - это инфекционное заболевание, вызываемое бактерией Mycobacterium tuberculosis, и респираторное заболевание, характеризующееся клубневыми образованиями, некрозом, абсцессами, фиброзом и кальцификацией легких. Он также может инфицировать почки, лимфатические узлы, кости, суставы и кожу.
Первичная лабораторная диагностика этой бациллы включает ее окрашивание для визуализации бактерий под микроскопом. Выборочный образец - мокрота или бронхоальвеолярный лаваж для выявления респираторной инфекции или образец реальной ткани.
Физиология
Mycobacterium tuberculosis - это палочковидный организм (бациллы), неподвижная, необязательная спора. Эта бактерия имеет размеры 0,4x3 микрометра в длину и подвергается бинарному делению (делению репродуктивной клетки) каждые 15-24 часа, что считается медленным по сравнению с другими бактериями. Из-за этого микобактерии могут появиться в культуральной среде в течение девяти недель.
Этот организм чувствителен к ультрафиолетовому излучению и теплу (например, к пастеризации), но сопротивляется химическим дезинфицирующим средствам.
Окраска по Граму
Mycobacterium tuberculosis нельзя классифицировать как грамположительные или грамотрицательные. Эта классификация основана на количестве пептидогликана в клеточной стенке бактерии. У грамположительных разновидностей есть толстый слой этой молекулы (около 90%), в то время как у грамотрицательных разновидностей есть тонкий слой (от 5% до 20%). Окраски по Граму проникают через клеточную стенку и связываются с находящимися в ней химическими компонентами. Под микроскопом окрашенные бактерии станут фиолетовыми или розовыми.
При микобактериях туберкулеза клеточная стенка состоит из пептидогликана, а также сложных липидов, которые препятствуют проникновению грамм-красителя. Клеточная стенка также сопротивляется обесцвечиванию под действием кислоты или спирта, поэтому микобактерии называют «кислотоустойчивыми». Липиды клеточной стенки - это миколиновая кислота, струнный фактор и D-воск. Если бы бактерии были окрашены, клетки были бы грамположительными или слегка бледными с очень слабой окраской.
Чтобы увидеть бактерии, необходимо использовать специальные красители, такие как окраска Аумарина или Жиля-Нельсона.
Окраска амарин-родамином
В процессе с использованием аурамина-родамина используется желтый флуоресцентный краситель для визуализации микобактерий туберкулеза под флуоресцентным микроскопом. В качестве контрастного красителя можно использовать перманганат калия или акридиновый апельсин. Под линзой бактериальные клетки станут зелеными.
Краситель аурамин-родамин более чувствителен, чем краситель Жиля-Нельсона, и более экономически выгоден.
Раскраска Циля-Нельсона
Пятно Циля-Нельсона было создано учеными Францем Цилем и Фридрихом Нильсеном и использует нагретый карбол-фуксин, высокую концентрацию кислотно-спиртовой смеси и контрастный краситель, такой как зеленый малахит или метиленовый синий. Под флуоресцентным микроскопом бактериальные клетки будут ярко-розовыми.
Краситель Циля-Нельсона - это эталон качества для предварительной идентификации микобактерий туберкулеза и микобактерий лепры.
Агар
В дополнение к идентификации под микроскопом микобактерии туберкулеза необходимо выращивать на специальной агаризованной культуре. Желатин Lowenstein-Jensen содержит сложные органические вещества (например, яйца и картофель), соли, глицерин и малахитовый зеленый (подавляющий другие бактерии). Могут быть добавлены антибиотики для дальнейшего подавления контаминирующих микроорганизмов. Образец помещается на этот агар, и бактерии начинают расти через три-девять недель.
Раствор питательной культуры, такой как альбумин и биотин, можно использовать для поддержки роста даже минимального количества целевых бактерий. Это известно как Миддлбрук 7H9 (или 7H12).
В обеих средах колонии выглядят как маленькие полированные светло-коричневые колонии.
Благодаря передовым технологиям микобактерии туберкулеза теперь можно выращивать с помощью автоматического считывателя. Жидкий раствор среды Миддлбрука 7H9 и флуоресцентное индикаторное соединение используют для мониторинга роста и сообщения о положительной или отрицательной инфекции.